Técnica de retrotranscripción - reacción en cadena de polimerasa (RT-PCR) en Leucemia Linfoide Aguda
Para el diagnóstico y seguimiento del proceso de remisión (enfermedad mínima residual) en pacientes con Leucemia Linfoblástica Aguda se emplea varias pruebas de laboratorio; entre ellas se encuentran las técnicas moleculares, mismas que cumplen un rol determinante desde hace ya algunos años y se mantienen hasta la actualidad.
En el ¨Estudio del reordenamiento molecular de los genes TEL/AML1 en la leucemia linfocítica aguda¨ se empleo el RT-PCR para demostrar la existencia de una translocación críptica, la t (12;21) (p12;q22) en la LLA de tipo B, que no se detecta por las técnicas citogenéticas convencionales e involucra los oncogenes TEL y AML1. Así se clasifica en un subgrupo a los pacientes con este marcador que indica una evolución favorable.
Para la investigación se estudió un total de 20 pacientes pediátricos con diagnóstico de LLA-B, en edades que oscilaron entre 1 y 14 años. En el momento del estudio, 18 pacientes se encontraban en la etapa de diagnóstico inicial y 2 en recaída hematológica, de quienes se obtuvo ARN.
Extracción de ARN
1. El aislamiento de leucocitos de muestras de médula ósea o sangre periférica mediante un gradiente de Ficoll-Telebrix 38 según el método convencional.
2. Purificación del ARN por el método de fenolcloroformo.
3. La integridad del ARN se comprobó con una electroforesis en gel de agarosa al 1,5 %.
Genes: Síntesis del ADNc con la enzima reverso transcriptasa y técnica de PCR para la amplificación del ADNc de la fusión TEL/AML 1 según el protocolo de BIOMED.
Reacción de PCR - máquina MJ-Research, INC. Versión 1.2.
1. Desnaturalización a 94 ° C, 1 min
2. Hibridación a 65 ° C, 1 min 35 ciclos
3. Elongación a 72 ° C, 1 min
Visualización: Electroforesis
Sensibilidad y especificidad: no se indica, pero si se manifiesta que se realiza una segunda reacción de PCR (anidado o nested)
REFERENCIAS:
